Davamlı rFC Endotoksin Təhlili Dəsti - Çin Təchizatçıları və Zavodundan Etibarlı BET Testi
Bakterial Endotoksin Aşkarlanması üçün Rekombinant Faktor C (rFC) Fluorometrik Təhlili haqqında Texniki Məlumat
rFC flüorometrik analizi, qlobal farmakopeyalara (USP , EP 2.6.14) uyğun olaraq, kəmiyyət bakterial endotoksin (lipopolisaxarid, LPS) aşkarlanması üçün at nalı xərçəngindən azad, in vitro metoddur. Onun əsas prinsipi, at nalı xərçəngi C Faktorunun LPS-ə bağlanan domenindən hazırlanmış rekombinant zülal olan rekombinant C Faktoruna (rFC) əsaslanır və təbii at nalı xərçəngi qanından asılılığı aradan qaldırır və davamlılıqla bağlı narahatlıqları həll edir.
1. Təhlil Prinsipi
Endotoksin LPS, xüsusilə rFC-nin LPS tanıma domeninə bağlanır və rFC-nin serin proteaz aktivliyini aktivləşdirən konformasiya dəyişikliyini tetikler. AMC flüoresansının intensivliyi, flüoresan mikroplastinka oxuyucusu vasitəsilə ölçülə bilən nümunədəki endotoksin konsentrasiyası ilə birbaşa mütənasibdir.
2. Əsas Texniki Parametrlər
- Həssaslıq: Ənənəvi Limulus Amebosit Lizat (LAL) analizləri ilə uyğun və ya onu aşan 0,005 EU/ml kimi aşağı konsentrasiyalarda endotoksinləri aşkarlayır.
- Xətti Aralıq: Adətən 0,005–50 AB/ml əhatə edir və bu da geniş konsentrasiya spektrində kəmiyyət təhlili aparmağa imkan verir.
- Xüsusiyyət: LPS üçün yüksək spesifiklik nümayiş etdirir; (1→3)-β-D-qlükanlar (LAL gel-laxtalanma analizlərində ümumi bir müdaxilə) tərəfindən aktivləşdirilmir və yalançı müsbət nəticələri azaldır.
- İnkubasiya şərtləri: Nəzarət olunan temperatur (37±1°C) və inkubasiya müddəti (60–120 dəqiqə) tələb olunur, flüoresans isə ~360 nm/~460 nm oyanma/emissiya dalğa uzunluqlarında ölçülür.
3. İş Axınına Baxış
- 1Matris müdaxiləsini aradan qaldırmaq üçün nümunələri (məsələn, dərman vasitələri, tibbi cihazlar, bioloji məhsullar) durulaşdırma və ya ekstraksiya yolu ilə hazırlayın.
- 2rFC reagentini, florogen substratı və nümunəni mikroplitə quyusunda qarışdırın.
- 3LPS-rFC bağlanmasına, aktivləşməsinə və substratın parçalanmasına imkan vermək üçün 37°C-də inkubasiya edin.
- 4Flüoresans intensivliyini ölçün; məlum endotoksin standartları (məsələn, Escherichia coli O55:B5 LPS) ilə yaradılan standart əyridən istifadə edərək endotoksin konsentrasiyasını hesablayın.
Bu analiz davamlılığı (nal nalı xərçənginin yığılmasının olmaması), etibarlılığı (aşağı müdaxilə, yüksək təkrar istehsal qabiliyyəti) və səmərəliliyi birləşdirir və bu da onu əczaçılıq və biotexnologiya sənayesində keyfiyyətə nəzarət üçün ideal edir.
Tez-tez Verilən Suallar (FAQ)
Rekombinant Faktor C (rFC) analizi nədir?
rFC analizi, bakterial endotoksinlərin (lipopolisaxaridlər) kəmiyyət aşkarlanması üçün istifadə edilən müasir, at nalı xərçəngindən azad, in vitro metoddur. O, ənənəvi LAL analizlərinə ekoloji cəhətdən təmiz alternativ kimi xidmət edir.
rFC analizi beynəlxalq farmakopeyalara uyğundurmu?
Bəli, rFC fluorometrik analizi endotoksin testi üçün USP və EP 2.6.14 daxil olmaqla, əsas qlobal farmakopeyalarla tanınır və uyğundur.
rFC fluorometrik analizi nə qədər həssasdır?
Test yüksək həssaslığa malikdir və ənənəvi LAL metodlarının göstəricilərinə uyğun və ya daha yüksək olan 0,005 EU/ml kimi aşağı konsentrasiyalarda bakterial endotoksinləri aşkar edə bilir.
rFC analizi qlükanlardan yalançı müsbət nəticələr verirmi?
Xeyr. Ənənəvi LAL analizlərindən fərqli olaraq, rFC analizi LPS üçün yüksək spesifiklik nümayiş etdirir və (1→3)-β-D-qlükanlar tərəfindən aktivləşdirilmir, bu da yalançı müsbət nəticələri əhəmiyyətli dərəcədə azaldır.
Analiz üçün standart inkubasiya parametrləri hansılardır?
Təhlil üçün 37±1°C nəzarətli temperaturda 60-120 dəqiqə ərzində inkubasiya tələb olunur. Flüoresans intensivliyi sonradan təxminən ~360 nm (həyəcan) və ~460 nm (emissiya) dalğa uzunluqlarında ölçülür.